金相顯微鏡的油鏡比干燥系高倍物鏡的工作距離短得多，短的只有0.1mm，且調焦程序又不同于干燥系物鏡，操作時須特別細心，防止油鏡壓碎標本或損壞油鏡。

　　先在干燥系高倍物鏡下找準被檢物，并置于視野中央，然后升高鏡筒約1.5cm，再把油鏡頭旋轉至對準正下方。在玻片標本的鏡檢部位滴一滴浸液，將頭偏于一側觀察，下降鏡筒，到物鏡的前透鏡與浸液接觸時停止。繼而從目鏡里細心觀察視野，旋轉粗準焦螺旋，使鏡筒緩慢地上升，剛出現不太清晰的物象時就換用細準焦螺旋，至物象清晰后進行觀察。

　　初次使用油鏡，也可按照干燥系物鏡的調焦程序調節焦距。即先下降鏡筒至物鏡接近蓋玻片，但絕不能壓在標本上，再上升物鏡調焦。但此法有將浸液擠出去和造成空泡的缺點。若上調粗準焦螺旋時，鏡筒已升到油浸鏡頭離開油滴，仍不能發現被檢目的物，須重新調節。

　　金相顯微鏡的油鏡使用的鏡頭油為香柏油或石蠟油。因香柏油黏稠度較高，使用之后擦拭較麻煩，因而許多人采用石蠟油代替使用。滴浸液時，要盡量避免氣泡的形成，如果形成了氣泡，可用解剖針尖將氣泡排在一邊，以免影響觀察。

　　油鏡使用完畢后，提升鏡筒約2cm，把金相顯微鏡的油鏡轉離光軸，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的大部分油，再用浸少量二甲苯的擦鏡紙擦去鏡頭上的殘余油跡，后用干擦鏡紙擦去鏡頭上的二甲苯。擦拭時要順鏡頭的直徑方向，不要沿鏡頭的圓周方向擦。玻片標本上的油也要進行清潔，即把一小張擦鏡紙蓋在載玻片油滴上，在紙上滴一些二甲苯，趁濕把紙往外拉，這樣連續作三四次即可干凈。